نورترن بلات

نورترن بلات Northern Blot

نورترن بلات تکنیکی است که در ردیابی توالی خاص RNA کاربرد دارد. این تکنیک توسط جمیز آلوین و جرج استارک در دانشگاه استندفورد در سال ۱۹۷۹ ابداع شد. نام این روش بصورت متضاد از نام ساترن بلاتینگ گرفته شده است. با وجود معرفی روش های پیشرفته و تولید اطلاعات در مقیاس انبوه، هنوز هم روش نورترن بلات معتبرترین روش برای نشان دادن اندازه رونوشت و میزان بیان آن است. از آنجا که RNA به سختی به کاغذهای نیتروسلولزی متصل می‌شود، از روش ساترن نمی‌توان برای مولکولهای RNA استفاده کرد. برای انتقال مولکولهای RNA از نورترن بلاتینگ استفاده می‌شود. اساس این روش مشابه روش ساترن بلاتینگ است با این تفاوت که در آن از کاغذهای فعال شده یا کاغذهای DBM، استفاده می‌شود. این کاغذها را می‌توان به راحتی با تیمارهای شیمیایی خاصی از کاغذ صافی تهیه کرد. در این روش، به علت تک رشته‌ای بودن RNA و تفکیک آن بر روی ژل واسرشت کننده نیازی به مرحله مجاورت با هیدرکسید سدیم نیست. در ضمن به علت حساس بودن مولکولهای RNA دقت بیشتری در انجام مراحل لازم می‌باشد.

مراحل نورترن بلاتینگ:
RNA استخراج شده از نمونه‌های زیستی بر روی ژل گذاشته می شود و نمونه‌ها بر اساس سایزشان بعد از انجام الکتروفورز مشخص میشوند. ژل بر روی یک ورقه از جنس نایلون یا نیترو سلولز که به روش ساندویچ قرار داده شده است بلاتینگ می شود، سپس پروب با موادی که اشعه رادیو اکتیو ساطع می کنند یا با کمی لومینسانس نشانه گذاری شده اند و ازخود نور ساطع می کنند را در اتاقک تاریک قرار میدهیم و جواب را بر روی فیلم x-ray مشاهده می کنیم.

 

4

خلاصه مراحل استخراج RNA تا شناسایی آن توسط نورترن بلاتینگ

Northern1

نحوه چیدمان برای انجام نورترن بلات

شناسایی microRNAs توسط نورترن بلاتینگ:
شناسایی microRNAها و اینکه چه اثری بر میزبان خود دارند اساساً با روش نورترن بلاتینگ انجام می شود. این روش سبب جداسازی microRNAs از نظر سایز می شود و میتواند اطلاعات جامعی از اندازه و ساختمان اصلی آن بدهد، بنابراین می تواند یک وسیله با ارزش برای کشف و شناسایی انواع جدید microRNA باشد.

مزیت های نورترن بلاتینگ:
• روشی استاندارد برای مطالعه میزان بیان ژن mRNA
• شناسایی میزان سایز mRNA
• مطالعه برروی اسپلایسینگ RNA
• مطالعه برروی نیمه عمر RNA
• استفاده برای تائید و چک کردن موش ترانسژنیک و ناک داون شده
• استفاده برای پروب های ناقص
• غشاء می تواند ذخیره شود و سالهای بعد دوباره بازبینی و پروب گذاری شود.
معایب نورترن بلاتینگ:
• شناسایی چند پروبی مشکل است.
• اگر نمونه ها حتی به میزان اندک با آنزیم RNase آسیب ببیند کیفیت جواب ومیزان بیان ها دچار مشکل منفی کاذب میگردد.
• روش استاندارد نورترن بلاتینگ حساسیت کمتری نسبت به روش های دیگر مثل RT-PCR دارد.

  1. عبداله اردیبهشت ۵, ۱۳۹۷ Reply

    ممنون از زحمات شما مفید بود

پاسخی بگذارید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *